Six antifungal agents at subinhibitory concentrations were used for investigating their ability to affect the growth and branching in Neurospora crassa. Among the antifungals herein used, the azole agent ketoconazole at 0.5 μg/ml inhibited radial growth more than fluconazole at 5.0 μg/ml while amphotericin B at 0.05 μg/ml was more effective than nystatin at 0.05 μg/ml. Morphological alterations in hyphae were observed in the presence of griseofulvin, ketoconazole and terbinafine at the established concentrations. The antifungal agents were more effective on vegetative growth than on conidial germination. Terbinafine markedly reduced growth unit length (GU) by 54.89%, and caused mycelia to become hyperbranched. In all cases, there was a high correlation between hyphal length and number of tips (r > 0.9). All our results showed highly significant differences by ANOVA, (p < 0.001, α = 0.05). Considering that the hyphal tip is the main interface between the fungus and its environment /through which enzymes and toxins are secreted and nutrients absorbed, it would not be desirable to obtain a hyperbranched mycelia with inefficient doses of antifungal drugs.

Se investigó el efecto de seis agentes antimicóticos en concentraciones subinhibitorias sobre el crecimiento y la ramificación en Neurospora crassa. El agente azólico ketoconazol a la concentración de 0,5 μg/ml inhibió el crecimiento radial más que el fluconazol a 5,0 μg/ml, y la anfotericina B a 0,05 μg/ ml fue más eficiente que 0,05 μg/ml de nistatina, entre los agentes poliénicos usados. En presencia de griseofulvina, ketoconazol y terbinafina a las concentraciones establecidas se observaron alteraciones morfológicas en las hifas. Los agentes antimicóticos fueron más eficientes sobre el crecimiento vegetativo que sobre la germinación conidial. La terbinafina redujo marcadamente (54,89%) la longitud de la unidad de crecimiento y provocó la hiperramificación del micelio. En todos los casos, existió gran correlación entre la longitud y el número de ápices de las hifas (r > 0,9). Todos los resultados mostraron diferencias altamente significativas de acuerdo con ANOVA (p < 0,001, α = 0,05). Considerando que el ápice de la hifa es la principal interfase entre el hongo y su ambiente, a través de la cual las enzimas y las toxinas son secretadas y los nutrientes son absorbidos, un micelio hiperramificado resultante de dosis ineficientes de agentes antimicóticos sería perjudicial.

Foram realizadas experiências em laboratório e em campo, com o intuito de verificar as funções ecológicas de produtos naturais produzidos pela macroalga bentônica Laurencia obtusa da costa brasileira. Nas experiências em laboratório, foi constatado que a concentração natural do extrato orgânico bruto de L. obtusa inibiu significativamente seu consumo por dois herbívoros, o caranguejo Pachygrapsus transversus e o ouriço-do-mar Lytechinus variegatus. Foi verificado que essa ação defensiva deve-se ao elatol, um sesquiterpeno halogenado encontrado como o produto natural mais abundante nessa alga vermelha. Além disso, verificou-se que a propriedade antiincrustante desse metabólito produzido por L. obtusa poderia torná-la menos atrativa à herbivoria por peixes. A ação protetora direta contra duas espécies de herbívoros e uma proteção indireta contra a herbivoria por inibição da incrustação constituem evidências de que o produto natural majoritário encontrado em L. obtusa do Brasil possui múltiplas funções ecológicas no ambiente. Por outro lado, reforça a idéia de que produtos naturais marinhos podem ter diferentes funções no mar, aumentando, assim, o valor adaptativo desses metabólitos.

Laboratory and field experiments were performed to assess the ecological roles of natural products produced by the Brazilian red seaweed Laurencia obtusa. Laboratory assays revealed that the natural concentration of the crude organic extract of L. obtusa significantly inhibited feeding by two herbivores: the crab Pachygrapsus transversus and the sea urchin Lytechinus variegatus. It was verified that this chemically defensive action was due to halogenated sesquiterpenoid elatol, found to be the major natural product of this red seaweed. In addition, it was verified that the antifouling property of the chemicals produced by L. obtusa could make this red alga less attractive for fish grazing. Direct protection against two herbivore species and indirect protection against herbivory by fouling inibition constitute evidence that the major natural product from Brazilian L. obtusa plays multiple environmental roles, thereby increasing the adaptive value of these metabolites. On the other hand, the evidence reinforces the idea that marine natural products may have different functions in the sea.

As propriedades antiincrustantes dos extratos brutos da gorgônia endêmica Phyllogorgia dilatata e de duas espécies de esponja, Aplysina fulva e Mycale microsigmatosa, foram avaliadas por intermédio de ensaios de campo. Para investigar essas propriedades sob condições ecologicamente relevantes, as concentrações naturais dos extratos brutos encontrados nesses invertebrados foram incorporadas a um gel estável que serviu de substrato para o assentamento de organismos incrustantes. O extrato bruto de A. fulva não mostrou efeito antiincrustante na concentração natural usada nos experimentos. De fato, os organismos incrustantes colonizaram significativamente mais o gel contendo extrato de A. fulva do que o gel-controle. Por outro lado, ambos os invertebrados, M. microsigmatosa e P. dilatata, produzem extratos brutos que foram seletivamente ativos contra o estabelecimento de balanídeos. As evidências obtidas aqui, por meio de experimentos em campo, podem ser importantes subsídios para futuras investigações visando à aplicação industrial de produtos naturais antiincrustantes em tecnologias de prevenção da bioincrustação marinha.

The crude organic extracts of the endemic gorgonian Phyllogorgia dilatata and two sponge species Aplysina fulva and Mycale microsigmatosa were evaluated for anti-fouling properties through field experiments. To investigate this property in ecologically meaningful conditions, crude extracts from these invertebrates were incorporated at concentrations naturally found in these marine organisms into a stable gel used as a substratum for fouling settlement. Crude extract from A. fulva showed no significant anti-fouling property at the natural concentrations used in the field experiments. In fact, fouling organisms settled significantly more on gels treated with A. fulva extract than on the control gel. On the other hand, both M. microsigmatosa and P. dilatata yielded crude extracts that exhibited a selective action inhibiting only the settlement of barnacles. The evidences obtained here by means of field experiments can provide a basis for future development of one kind of natural antifoulant technology to prevent marine biofouling.

A preferência alimentar do gastrópodo endêmico Astraea latispina por macroalgas bentônicas foi avaliada em laboratório com o intuito de evidenciar o papel de metabólitos secundários em sua escolha alimentar. Dentre as macroalgas examinadas, Plocamium brasiliense foi preferencialmente consumida, enquanto Sargassum furcatum e Dictyota cervicornis foram menos consumidas. Os extratos brutos e/ou metabólitos majoritários puros das duas espécies de macroalgas potencialmente produtoras de defesa química (P. brasiliense e D. cervicornis) foram testados em relação à A. latispina. As três concentrações de extrato bruto (50%, 100%: concentração natural, e 200%: peso seco -- ps) de P. brasiliense não inibiram a herbivoria dessa espécie de gastrópodo. Por outro lado, as três concentrações de extrato bruto de D. cervicornis (50%, 100% e 200% ps) inibiram a herbivoria de A. latispina. Constatou-se que a propriedade deterrente do extrato de D. cervicornis em relação ao gastrópodo A. latispina deve-se à mistura dos diterpenos isolinearol/linearol (4:1 -- 0,08% ps). Este é o primeiro relato de que D. cervicornis produz defesa química contra herbívoros, particularmente diterpenos com esqueleto carbônico do tipo secodolastano. Além disso, esses resultados ampliam o espectro de ação dos metabólitos secundários encontrados em espécies desse gênero de alga parda.

Seaweed preference by the Brazilian endemic gastropod Astraea latispina was examined in the laboratory to evaluate the role of secondary metabolites in determining food choice. Of three species of seaweeds examined, Plocamium brasiliense was highly preferred; less so were Sargassum furcatum and Dictyota cervicornis were preferred less. Extracts and/or pure major metabolites of the two potentially chemically-defended seaweeds (P. brasiliense and D. cervicornis) were tested as feeding deterrents against A. latispina. Algal extract assays demonstrated that three concentrations of crude organic extract of the red alga P. brasiliense (50%, 100%: natural concentration, and 200% of dry weight: dw) did not affect feeding of this gastropod. In contrast, the three concentrations of crude organic extract of the brown alga D. cervicornis (50%, 100% and 200% dw) inhibited feeding by A. latispina. The chemical deterrent property of D. cervicornis extract against the gastropod A. latispina occurred due to a mixture of the secodolastane diterpenes isolinearol/linearol (4:1 -- 0.08% dry weight). This is the first report showing that Dictyota cervicornis produces a chemical defense against herbivores using secodolastane diterpenoid. In addition, these results widen the action spectrum of secondary metabolites found in seaweed belonging to this brown algal genus.

Estudos recentes demonstram que defesas químicas de algas que inibem o consumo exercido por peixes ou ouriços não inibem herbívoros com pequena mobilidade. As espécies de algas bentônicas Dictyota menstrualis e Dictyota mertensii foram estudadas tendo por objetivo avaliar a atuação de seus extratos brutos nos processos de quimiotaxia e defesa frente aos herbívoros de pequena mobilidade, o anfípodo Parhyale hawaiensis e o caranguejo Pachygrapsus transversus. Os ensaios de preferência alimentar demonstraram que P. hawaiensis não consomem ambas as espécies de Dictyota. Por outro lado, P. transversus também não consomem D. menstrualis, mas se alimentam de grandes quantidades de D. mertensii. Os extratos brutos de ambas as espécies de Dictyota inbiram a herbívoria por estes herbívoros. Além disso, os ensaios demonstraram que os herbívoros apresentaram reação de quimiotaxia negativa, provavelmente devido à presença de metabólitos complementares presentes no alimento artificial. Considerando que ambas as espécies de Dictyota exibem extratos brutos ativos frente a estes herbívoros de pequena mobilidade, supomos que a não-ocorrência em estreita associação com as algas D. menstrualis e D. mertensii pode explicar os resultados obtidos.

Recent studies have show that small marine herbivores with limited mobility (mesograzers) often feed on macroalgae chemically defended against fishes or sea-urchins. In order to verify the involved mechanisms of chemotaxis or chemical defense into this process in Brazilian littoral, two species of brown alga Dictyota menstrualis and Dictyota mertensii were studied against the limited mobility herbivores, the amphipod Parhyale hawaiensis and the crab Pachygrapsus transversus. These two species were studied in order to verify the action of their crude extracts in the defense and chemotaxis processes related to limited mobility of these herbivores. Feeding preference assays revealed that P. hawaiensis do not eaten these Dictyota species. P. transversus do not eaten D. menstrualis either, but consumed large amounts of D. mertensii. Chemical deterrence assays showed that extracts of these species act as feeding deterrent to both species of herbivores. In addition, chemotaxis assays demonstrated that both herbivores are significantly negative chemotactic probably due to the presence of complementary metabolites into artificial foods. Considering that both Dictyota species exhibit active extracts against these small herbivores, we suppose that the non-occurrence of these herbivore species in close relationship with the seaweeds D. menstrualis and D. mertensii may explain the defense action of both extracts related to these mesograzers.